Kouzelník Wizpig zkouší tyranizovat mírumilovné obyvatele ostrova Timber. Hráči se tedy musí vrhnout společně s Diddy Kongem a jeho dvěma kamarády, Dixie Kongem a Tiny Kongem, do dobrodružného závodu, jehož účelem je dát Wizpigovi pořádně přes rypák. Dopravní prostředek si mohou hráči vybrat podle svých představ – motokáru, vznášedlo nebo letadlo, které je navíc možné vylepšit získáním tuningových součástek. Na více než 20 omšelých i sytě barevných 3D tratích se ukáže, zda je možné zahnat z ostrova Wizpiga i jeho prohnanou opičí bandu.
Pomocí dotekové obrazovky mohou fanoušci Nintenda DS vtisknout hře svou vlastní osobní značku: Je totiž možné vytvořit si vlastní závodní dráhu nebo individuální herní symboly a reklamní tabule podél závodní dráhy. Přes mikrofon lze dokonce přijímat nějaké zvukové efekty, která potom pravidelně zazní u určitých akcí.
Diddy Kong Racing nabízí fanouškům řadu módů pro jednoho i více hráčů. Nejdříve budou hráči závodit v Dobrodružném módu na pěti rozdílných herních světech. Přitom bude jejich úkolem sbírat balóny, se kterými si odemknou nové herní oblasti a nakonec snad zúčtují i s velezlosynem Wizpigem. Kromě toho budou muset sesbírat co nejvíce mincí umístěných na kraji cesty, protože díky nim mohou modernizovat své vozítko nebo si pořídit další pomocné prostředky.
Pokud se hráč necítí připravený na na závodění, může navštívat Tréninkový mód pro jednoho hráče. Zde může nejenom trénovat různé závodní triky, ale také vyzvat na zápas virtuální, počítačem řízené protivníky nebo zkusit závod na čas a vytvořit nový rekord. A kromě toho zde může volně hrát další veselé úkoly.
Jedním z nejvýznamnějších doplňků oproti originálu je ovšem Multiplayer mód. Hráči mohou pozvat na závod nejenom kamarády ze stejného místa, ale prostřednictvím Nintendo Wi-Fi Connection také prakticky jakéhokoli vlastníka Nintenda DS na celém světe. Při osobním setkání může proti sobě soupeřit až osm kamarádů v několika herních módech: Jednotlivý závod, Závod v tropech, Bitevní kurzy, Plaketový flám a Závod na přání. Přes Wi-Fi může každý vyzvat až šest protivníků ze všech zemí a to v módu Jednotlivý závod, Bitevní kurs a Závod v tropech.
